خلاصه روش اجرای طرح:
ابتدا طبق متد Ionotropic gelation، کیتوزان در محلول اسید استیک 4% (v/v) حل شده، و داروی 5_آمینو سالیسیلیک اسید، هسپریدین به محلول کیتوزان اضافه شده و سپس TPP (تری پلی فسفات) که به عنوان یک عامل کراس لینک استفاده می شود، اضافه خواهد شد و در نهایت دارو در این نانو ذرات بارگیری می شود که سایز ذرات افزایش می یابد.مورفولوژی نانوذرات کیتوزانی حاوی 5_آمینو سالیسیلیک اسید و هسپریدین با SEM بررسی خواهد شد.به منظور محافظت از نانو ذرات کیتوزانی در محیط اسیدی معده از Eudragit S100 به عنوان پوششی برای آنها استفاده می شود. Eudragit S100 درPBS PH:6.8 حل شده سپس محلول کیتوزان/5-آمینو سالیسیلیک اسید/هسپریدین اضافه خواهد شد، که Eudragit S100 با نیروی الکترواستاتیکی به سطح این نانو ذرات متصل می شود. در مرحله بعد، اثر این نانوذرات بر روی سلول های HEK-293 در محیط خارج بدن بررسی خواهد شد. به منظور ارزیابی اثر محافظتی Eudragit S100 ، پایداری و ازاد شدن دارو از نانو ذرات کیتوزانی آنها را در معرض SGF(Simulated Gastric Fluid) مایع شبیه سازی معده(./1M HCL با پپسین 1%) و SIF(Simulated Intestinal Fluid) مایع شبیه سازی شده روده (PBS PH6.8 با تریپسین 1%) قرار داده خواهد شد. و میزان آزاد شدن هسپریدین و 5_آمینو سالسیلیک اسید خارج شده از نانو ذرات را با اسپکتروسکوپی بررسی می کنیم. سپس رت ها با وزن حدود 250- 200 گرم بعد از حداقل 24 ساعت ناشتایی، با داروی بیهوشی کتامین/زایلوزین بیهوش می شوند. در مرحله بعد با استفاده از سوند نلاتون به طول 8 سانتی متر 1 میلی لیتر اسید استیک 4% به ازای هر موش وارد کولون موش ها می شود و موشها 15 ثانیه صورت افقی نگه داشته می شوند (1) تا اسید از بدن موش خارج نشود.
گروه های مورد مطالعه:
- گروه کنترل مثبت (بدون آسیب)
- گروه کنترل منفی (آسیب ایجاد شده اما هیچ درمانی نمی گیرند)
- گروه دریافت کننده نانوذرات کیتوزان
- گروه دریافت کننده نانوذرات کیتوزان حاوی هسپریدین
- گروه دریافت کننده نانوذرات کیتوزان حاوی 5_ آمینو سالیسیلیک اسید
- گروه دریافت کننده نانوذرات کیتوزان حاوی هسپریدین و 5_ آمینو سالیسیلیک اسید
- گروه دریافت کننده نانوذرات کیتوزان حاوی داروی استاندارد طلایی (داروی متناسب با پیشرفت بیماری استفاده می شود.)
در نهایت بعد از 28 روز از درمان، جهت بررسی بهبود کولیت، رت ها سکریفایس خواهند شد . تست های بافت شناسی شامل PAS و TCM و عکس برداری از بافت با SEM، با هدف بررسی اثر نانوذرات کیتوزان حاوی هسپریدین و 5_ آمینو سالیسیلیک اسید بر کولیت القا شده در رت، انجام خواهد شد. همچنین موارد زیر نیز بررسی می شوند:
- پایش روزانه وزن بدن
- پایش خونریزی رکتال
- پایش قوام مدفوع
- بررسی درصد بقا
|